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阴离子交换色谱柱的清洗

更新时间：2019-10-29 10:02:29 发布者：admin

在色谱柱使用时，需要定期对色谱柱进行清洗。特别是阴离子交换色谱柱的使用必须要根据使用操作来进行清洗。

通常阴离子交换色谱柱的清洗方法有三种，分别是用于清洗酸溶性、碱溶性或有机污染物，而且在清洗操作时，也都需要严格的按照色谱柱清洗操作来进行清洗，否则会导致色谱柱的局部高压而损坏色谱柱。对于有机溶剂清洗色谱柱，需要逐步减少有机溶剂的量以避免由于混合的流动相黏度的变化。

（一）选择合适的清洗溶剂

1对低价亲水污染物：用10倍的淋洗液；

2对高价亲水污染物：用1~3mol/l的盐酸做淋洗液；

3对金属污染物：会引起色谱峰不对称性，可采用络合剂酸类，如0.2mol/l草酸；

4有机污染物：有机污染物会引起色谱柱效降低，可以采用兼容的有机溶剂清洗，有时也可以采用高浓度的盐酸与有机溶剂混合清洗则更有效。

（二）清洗过程

1配制500mL合适的清洗溶液；

2断开抑制器中，分别清洗保护住和分离柱，如果分离柱和保护住串联清洗，则将保护柱接在分离柱之后；

3设置流速对2mm色谱柱采用0.5ml/min，而对4mm色谱柱采用2ml/min；

4用二次去离子水冲洗色谱柱15min；

5用清洗液清洗色谱柱60min;

6用二次去离子水冲洗色谱柱15min；

7连接抑制器，用淋洗液平衡色谱柱。

阴离子交换色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护阴离子交换色谱柱。

①避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况：柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。

②应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。③一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱：头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

④选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。

⑤）避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一一保护柱。保护柱-般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。

⑥经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50’°75ml。

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